配型原因
根據(jù)干細(xì)胞的來(lái)源不同可分為自體、同基因(syngeneic)和異基因(allogeneic)BMT。同基因骨髓移植是指同卵孿生同胞間的移植,由于供、受者在遺傳學(xué)上相同,故與自體骨髓移植一樣,不存在免疫不相容的問(wèn)題。異基因的骨髓移植(allo-BMT)的供髓細(xì)胞在遺傳上與受者細(xì)胞起源不同,與腎、肝、心等器官移植相比,allo-BMT更易發(fā)生排斥反應(yīng),而一旦供髓植活后又可發(fā)生移植物抗宿主病(GVHD),故供、受者間要進(jìn)行嚴(yán)格的組織配型,受者在移植前必須用免疫抑制劑預(yù)處理。
什么是配型
選擇與受者組織相容性配合的供體。
在選擇適合的供體時(shí),首先從在兄弟姐妹中選擇供髓者;如不成,則在近親及血緣無(wú)關(guān)的自愿者中尋找供髓者。在供者選擇上首先在同胞中用血清學(xué)方法做HLA檢查,所得結(jié)果相差不大后再做淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(MLC)來(lái)檢測(cè)D位點(diǎn)并核實(shí)HLA配型。即使血清學(xué)或分子生物學(xué)方法所不能檢出的組織相容抗原的差別往往可通過(guò)MLC測(cè)出。目前已采用分子遺傳學(xué)技術(shù)直接檢測(cè)HLA基因,如多聚酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù),序列特異性寡核苷酸探針雜交(SSOPA)及限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)技術(shù),可作為BMT組織配型的重要補(bǔ)充,尤其適用于無(wú)關(guān)供者組織配型的核實(shí)。
HLA配型的重要性及骨髓移植的過(guò)程
在HLA配型方面,主要進(jìn)行HLA-A、HLA-B和HLA--DR三對(duì)位點(diǎn)的配型,只有兩個(gè)個(gè)體的HLA配型完全相同才能進(jìn)行造血干細(xì)胞移植,否則可能會(huì)發(fā)生兩種情況,一是病人體內(nèi)的免疫細(xì)胞把植入的供體細(xì)胞當(dāng)作"異物"或"入侵者"進(jìn)行攻擊,稱為"移植排斥反應(yīng)",其結(jié)果是移植失敗,"造血"不能在病人體內(nèi)植活。另一種可能是供體的造血細(xì)胞在病人體內(nèi)植活,產(chǎn)生大量的免疫活性細(xì)胞,這些細(xì)胞"反客為主"把病人的組織和細(xì)胞當(dāng)作"異物"和"入侵者"進(jìn)行攻擊,最容易受攻擊的組織和器官是皮膚、肝臟和腸道,發(fā)生皮疹、黃疸、轉(zhuǎn)氨酶升高和腹瀉不止甚至血便,稱為移植物抗宿主?。℅VHD),嚴(yán)重者可致命。
由于HLA-AB的多樣性最明顯,一般對(duì)志愿者先做HLA-AB的分型,待檢索供、受者HLA-AB相配后,再對(duì)供者作HLA-DR分型檢測(cè),如果供、受者的HLA完全相配,同時(shí)供者健康檢查合格,就可以著手準(zhǔn)備移植手術(shù)。用化學(xué)藥物和放射治療摧毀患者身上的病變?cè)煅?xì)胞后再接受移植。植入方法如同輸血,植入的造血干細(xì)胞在人體繁植,重建造血和免疫系統(tǒng),病人逐漸恢復(fù)健康。骨髓移植對(duì)白血病的有效治愈率可達(dá)到65-75%。
HLA配型技術(shù)
HLA血清學(xué)方法
這種方法出現(xiàn)的比較早,技術(shù)比較成熟,主要應(yīng)用于HLA Ⅰ類抗原(HLA-A、HLA-B)的分型,適用于骨髓移植前大量骨髓捐獻(xiàn)者的HLA-AB檢索工作。而在HLA-DR類分型中因高質(zhì)量的定型血清來(lái)源困難,存在交叉反應(yīng),對(duì)抗原特異性確定有出入,而血清學(xué)表型的判定還受分離B淋巴細(xì)胞的純度與活力、補(bǔ)體質(zhì)量等因素的影響,因此導(dǎo)致比較高的分型錯(cuò)誤率。
HLA復(fù)合體微衛(wèi)星分析技術(shù)
在真核細(xì)胞中,某些DNA組分在堿基成分上與主要的DNA組分明顯不同,且在CsSI梯度離心時(shí)能分離為明顯的區(qū)帶,其中含有2~3個(gè)堿基的成為微衛(wèi)星(microsatellite)。在真核細(xì)胞常染色體中,微衛(wèi)星可以不同的間隔和頻率重復(fù)出現(xiàn),從而表現(xiàn)為高度多態(tài)性。在HLA基因復(fù)合體中或其臨近區(qū)域,這種微衛(wèi)星重復(fù)序列已繪制成圖。因此,可應(yīng)用序列特異性引物,通過(guò)PCR擴(kuò)增,根據(jù)產(chǎn)物的長(zhǎng)度確定微衛(wèi)星的多態(tài)性。微衛(wèi)星分析技術(shù)能夠迅速準(zhǔn)確的識(shí)別供、受者間HLA單倍型的異同,且由于它包括HLA復(fù)合體的更寬區(qū)域,可能比HLA-Ⅰ或Ⅱ類單個(gè)座位等位基因的分析更為有效,從而為器官移植(尤其是骨髓移植)時(shí)供體的選擇提供了重要的參數(shù)。
MHC區(qū)段配型技術(shù)
區(qū)段配型(block matching)的理論依據(jù)為:在MHC復(fù)合體長(zhǎng)期進(jìn)化的過(guò)程中,由于各MHC基因的內(nèi)含子并不編碼功能蛋白,其所接受的選擇壓力不大,故相對(duì)外顯子而言較為穩(wěn)定,可延續(xù)許多世代而不發(fā)生改變。研究資料已證實(shí),在一組等位基因中,可能共享某一段內(nèi)含子序列。從進(jìn)化和遺傳的角度看,這樣的一組等位基因是由同一個(gè)祖先譜系進(jìn)化而來(lái),共同享有的內(nèi)含子序列即為該譜系的特異性標(biāo)記。因此,不同的MHC等位基因可據(jù)此歸于不同的譜系,且不同譜系間MHC基因序列的差異明顯大于同一譜系內(nèi)MHC基因序列的差異。對(duì)隨機(jī)人群應(yīng)用block matching進(jìn)行移植配型,其目的是尋找與受者屬于同一HLA譜系的供者,以避免移植后出現(xiàn)較強(qiáng)的排斥反應(yīng)。該技術(shù)最大的優(yōu)點(diǎn)并非在于單個(gè)HLA基因的相配,而是著眼于整個(gè)HLA單體型基因序列最大程度的相似,其實(shí)踐應(yīng)用價(jià)值已經(jīng)在HLA多態(tài)性的家系調(diào)查和BMT療效的回顧性分析中得到初步證實(shí)。