概念與原理

（f）：

f= (As/ms)/(Ar/mr)

其中As和Ar分別為內(nèi)標(biāo)物和對(duì)照品的峰面積或峰高，ms和mr分別為加入內(nèi)標(biāo)物和對(duì)照品的量。

再取各品種項(xiàng)下含有內(nèi)標(biāo)物的待測(cè)組分溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖，再根據(jù)含內(nèi)標(biāo)物的待測(cè)組分溶液色譜峰響應(yīng)值，計(jì)算含量（mi）：

mi=f×Ai/(As/ms)

其中 Ai和As分別為供試品和內(nèi)標(biāo)物的峰面積或峰高，ms為加入內(nèi)標(biāo)物的量。必要時(shí)，再根據(jù)稀釋倍數(shù)、取樣量和標(biāo)示量折算成為標(biāo)示量的百分含量，或根據(jù)稀釋倍數(shù)和取樣量折算成百分含量。

內(nèi)標(biāo)物

定義

將一個(gè)已知質(zhì)量的純物質(zhì)，加入至待測(cè)樣品溶液中，以此純物質(zhì)的量為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比測(cè)定待測(cè)組分的含量，該純物質(zhì)稱為內(nèi)標(biāo)物。

選擇要求

a．原樣品中不含組分

b．與待測(cè)物保留時(shí)間應(yīng)接近,但不重疊

c．為高純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，或含量已知物質(zhì)

d.在給定色譜條件下具有一定化學(xué)穩(wěn)定性。

影響因素

影響內(nèi)標(biāo)和被測(cè)組分峰高或峰面積比值的因素主要有化學(xué)方面的、色譜方面的和儀器方面的三類(lèi)。

由化學(xué)方面的原因產(chǎn)生的面積比的變化常常在分析重復(fù)樣品時(shí)出現(xiàn)。

化學(xué)方面的因素包括：

1、內(nèi)標(biāo)物在樣品里混合不好；

2、內(nèi)標(biāo)物和樣品組分之間發(fā)生反應(yīng)，

3、內(nèi)標(biāo)物純度可變等。

對(duì)于一個(gè)比較成熟的方法來(lái)說(shuō)，色譜方面的問(wèn)題發(fā)生的可能性更大一些，色譜上常見(jiàn)的一些問(wèn)題對(duì)絕對(duì)面積的影響比較大，對(duì)面積比的影響則要小一些，但如果絕對(duì)面積的變化已大到足以使面積比發(fā)生顯著變化的程度，那么一定有某個(gè)重要的色譜問(wèn)題存在，比如進(jìn)樣量改變太大，樣品組分濃度和內(nèi)標(biāo)濃度之間有很大的差別，檢測(cè)器非線性等。進(jìn)樣量應(yīng)足夠小并保持不變，這樣才不致于造成檢測(cè)器和積分裝置飽和。如果認(rèn)為方法比較可靠,而色譜柱看來(lái)也是正常的話，應(yīng)著重檢查積分裝置和設(shè)置、斜率和峰寬定位。對(duì)積分裝置發(fā)生懷疑的最有力的證據(jù)是：面積比可變，而峰高比保持相對(duì)恒定。

特點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn)

1.測(cè)定的結(jié)果較為準(zhǔn)確，由于是通過(guò)測(cè)量?jī)?nèi)標(biāo)物及被測(cè)組分的峰面積的相對(duì)值來(lái)進(jìn)行計(jì)算的，因而在一定程度上消除了操作條件等的變化所引起的誤差。

2. 操作過(guò)程中樣品和內(nèi)標(biāo)是混合在一起注入色譜柱，因此只要混合溶液中被測(cè)組分與內(nèi)標(biāo)的量的比值恒定，上樣體積的變化不會(huì)影響影響定量結(jié)果。

3.內(nèi)標(biāo)法抵消了上樣體積，乃至流動(dòng)相、檢測(cè)器的影響。

缺點(diǎn)

1.操作程序較為麻煩。

2.有時(shí)尋找合適的內(nèi)標(biāo)物也有困難。

注意事項(xiàng)

當(dāng)配制校正因子測(cè)定用的對(duì)照溶液和含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的待測(cè)組分溶液使用同一份內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液時(shí)，則配制內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液不必精密稱（量）取。

采用內(nèi)標(biāo)法定量時(shí)，內(nèi)標(biāo)物的選擇是一項(xiàng)十分重要的工作。理想地說(shuō)，內(nèi)標(biāo)物應(yīng)當(dāng)是一個(gè)能得到純樣的已知化合物，這樣它能以準(zhǔn)確、已知的量加到樣品中去，它應(yīng)當(dāng)和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學(xué)性質(zhì)(如化學(xué)結(jié)構(gòu)、極性、揮發(fā)度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應(yīng)特征，最好是被分析物質(zhì)的一個(gè)同系物。當(dāng)然，在色譜分析條件下，內(nèi)標(biāo)物必須能與樣品中各組分充分分離。需要指出的是，在少數(shù)情況下，分析人員可能比較關(guān)心化合物在一個(gè)復(fù)雜過(guò)程中所得到的回收率，此時(shí)，他可以使用一種在這種過(guò)程中很容易被完全回收的化合物作內(nèi)標(biāo)，來(lái)測(cè)定感興趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所說(shuō)的選擇原則。